Práctica 4 : Cultivo celular

1.OBJETIVO

Familiarizarnos al hacer este experimento con un sistema de cultivo sencillo y fiable. También nos introduciremos en los principios básicos del cultivo celular y usaremos la técnica estéril para ir visualizando el crecimiento celular y la viabilidad de las células del insecto Sf9. Usaremos el medio preparado en la práctica número 3.

2.FUNDAMENTO

El cultivo celular es un proceso mediante el que las células (procariotas, eucariotas o vegetales) pueden cultivarse en condiciones controladas. En la práctica, el término "cultivo celular" se usa normalmente en referencia al cultivo de células aisladas de eucariotas pluricelulares, y especialmente de células animales. Los cultivos de células pueden definirse como un sistema formado por células provenientes de un órgano o un tejido, normal o tumoral, mantenidas en medios de cultivo de composición química definida y en condiciones de temperatura, pH, aireación y humedad controladas. De esta forma se asegura su supervivencia y multiplicación, manteniendo todas sus funciones metabólicas de una manera semejante a las que tenían en el huésped.  

Producir células implica un alto grado de preparación por parte del recurso humano especializado, para dar el adecuado manejo a los conceptos básicos de esterilidad, así como destreza en la detección de problemas.

3.MATERIAL

• Medio de cultivo (penicilina) en alícuota.
• Suspensión celular de insectos 
• T-flasks.
• Pipeta de 10 mL y otra de 2 mL
• Pipeta de 2 mL
• Auxiliar de pipeteo
• Alcohol 70%
• Cabina de flujo laminar
• Baño termostático
• Gradilla

4.PROCEDIMIENTO

Comenzaremos sacando el tubo cónico Falcon de la nevera el cual contiene el medio de cultivo de penicilina y lo introduciremos dentro de un baño termostático y lo programamos a una temperatura de unos 37℃.

Una vez alcanzada la temperatura llevamos el tubo a la zona de trabajo, o sea a la cabina de flujo laminar, pero antes de introducirlo dentro hay que desinfectarlo por fuera con alcohol del 70%. Antes que nada, hay que realizar la práctica en condiciones asépticas al para trabajar con las células tal y como hablaba en la práctica número 3.

En primer lugar, usaremos un frasco de Roux o también llamado T-flask que sirven para mantener líneas celulares , en monocapa en suspensión. En este frasco introduciremos 1 mL de suspensión de células. Para ello, usaremos un pipeta de 2 mL y habrá que usarla abriendo cuidadosamente su envoltorio y así poder unir el extremo de esta con el auxiliar de pipeteo. 

Después colocaremos la pipeta de 10 mL en el auxiliar y enrasaremos 4 mL en la alícuota con penicilina. A continuación, una vez listo el cultivo celular , este se debe introducir en la estufa de incubación a 37℃ para que las células proliferen y crezcan.
Aquí os dejo unas imágenes de la práctica que realizó mi compañera:

5.ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Hemos realizado nuestro primer cultivo celular correctamente y solo queda esperar a que nuestras células proliferen.

6.CONDICIONES DE SEGURIDAD

• Es importante no trabajar en la cabina con los rayos UV.
• También es importante conocer la composición de todo lo que se vaya a manejar , ya que alguien puede ser alérgic@ a una o varias sustancias.
•  Es importante tener cuidado con la estufa para no quemarse y a la hora de cerrarla.
•  También es imprescindible el uso de un EPI adecuado, en este caso guantes y bata.

7.GESTIÓN DE RESIDUOS

Los residuos generados como las pipetas y sus envoltorios estarán en su recipiente de residuos y posteriormente serán vertidos a su correspondientes contenedores.